A detecção plasmônica em tempo real, livre de rótulo, permite a quantificação de isoformas de mRNA processadas de forma alternativa

Ciência é coisa de menina, sim! | Priscila Kosaka | TEDxParquedasNaçõesWomen (Julho 2019).

Anonim

O processamento alternativo de precursores de mRNA permite que as células gerem diferentes saídas de proteína do mesmo gene, dependendo de seu status de desenvolvimento ou homeostático. É um processo complexo que permite a geração de variantes proteicas a partir de um repertório limitado de genes codificadores de proteínas em organismos eucarióticos. Sua desregulação está fortemente ligada ao início e à progressão da doença. Um artigo recente da Biosensors and Bioelectronics relata uma tecnologia simples e robusta usando um biossensor de ressonância de plasmon de superfície (SPR) para monitoramento livre de rótulo de eventos de splicing alternativos em tempo real.

As metodologias atuais para monitorar a demanda alternativa de splicing elaboram procedimentos e freqüentemente apresentam dificuldades em discernir entre isoformas estreitamente relacionadas, por exemplo, devido a hibridização cruzada durante sua detecção. A nova abordagem descrita no artigo não requer qualquer síntese de cDNA ou amplificação por PCR. A metodologia foi aplicada ao RNA isolado de células HeLa para a quantificação de isoformas do splicing alternativo do gene Fas, envolvidos na progressão do câncer através da regulação da morte celular programada. Os resultados demonstram que a nova metodologia de biossensor é específica de isoforma, praticamente sem hibridização cruzada, atingindo limites de detecção na faixa picoMolar. Resultados semelhantes foram obtidos para a detecção das isoformas do mRNA do gene BCL-X.

Padrões de splicing alternativos desregulados podem ser considerados como uma característica do câncer. Assim, a identificação de variantes alteradas como biomarcadores poderia esclarecer o desenvolvimento do câncer. A tecnologia de biossensor desenvolvida pelo Grupo ICN2 em colaboração com pesquisadores do CRG pode facilitar enormemente a exploração de biomarcadores de splicing alternativos no diagnóstico e terapia de doenças.